尊龙凯时推出的FastPure® EndoFreePlasmidMaxiKit(DC202)是一款高效、低内毒素的质粒提取试剂盒。该产品支持转染级别实验,能够从高拷贝质粒中提取出高达0.2mg-15mg的质粒DNA,操作简便且易于保存。除了RNaseA和内毒素清除剂外,其他组分可以在室温下保存;而RNaseA需在-30℃至-15℃下保存,内毒素清除剂在2℃至8℃下可保存一个月,长期应存放在-30℃至-15℃之间。特别提醒,低温保存可能导致溶液出现沉淀,使用前应在室温下放置一段时间,如有必要,可在37℃水浴中预热10分钟以确保充分混合后再使用。
本试剂盒特别适合提取150ml-300ml过夜培养的细菌液。采用改进的SDS-碱裂解法,裂解细胞后,通过内毒素清除剂选择性结合并离心去除内毒素,随后在高盐、低pH环境下,利用硅基质膜选择性结合质粒DNA。最终,通过低盐高pH的洗脱缓冲液将纯净的质粒DNA从膜上洗脱下来。提供的吸附柱内采用进口高品质吸附膜,确保了柱间吸附量差异极小和重复性良好,避免了国产试剂盒膜质量不稳定的缺陷。
FastPure® EndoFreePlasmidMaxiKit不需要使用有毒试剂如C6H6O和CHCl3,也无需进行乙醇沉淀,能够快速提取0.2mg-15mg的纯净高拷贝质粒DNA,提取率高达80-90%。该产品清除内毒素的能力极强,内毒素含量低于0.1EU/μgDNA,适用于多种分子生物学实验,包括酶切、PCR、体外转录、转化和测序等。
在实验性能上,使用尊龙凯时的FastPure® EndoFreePlasmidMaxiKit提取不同大小的质粒,通过1%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明该试剂盒针对30kb、50kb、59kb和215kb不同大小的质粒提取效果优越,产量高。同时,通过使用M3K质粒进行酶切验证,结果显示提取的质粒纯度高,完全支持下游酶切反应。
本产品广泛适用于150-300ml过夜培养的细菌液,可以实现大规模的质粒提取。试剂盒组分包括:RNaseA(10mg/ml,用于去除RNA)、BufferP1(细菌悬浮液,首次使用前需加入RNaseA)、BufferP2(细菌裂解液,含SDS/NaOH)、BufferP4(中和液)、内毒素清除剂(有效去除质粒粗提液中的内毒素)、BufferPW(洗涤液,首次使用前需添加一定量的无水乙醇)、BufferTB(洗脱缓冲液)、FastPureDNAMaxiColumns(质粒DNA吸附柱)以及CollectionTube(50ml滤液收集管)。用户需准备无水乙醇、异丙醇和50ml高速离心管。
此外,尊龙凯时的FastPure® EndoFreePlasmidMiniKit是一款高产且无内毒素的小型提取试剂盒,能够在25分钟内提取出高达50µg的质粒DNA,其内毒素残留量≤0.1EU/µg,适用于转染级别实验。该试剂盒同样使用优化的碱裂解法,通过硅胶膜吸附技术可特异性结合质粒DNA,有效去除内毒素和蛋白等杂质。
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