培养条件：细胞生长应在1640培养基中，添加10% FBS和1% PS，适用于贴壁和悬浮细胞，培养温度为37℃。

传代方法：首次传代建议比例为1:2；若细胞在培养瓶中的汇合度未超过80%，应将完全培养液收集至离心管中，保留5ml继续培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代。

液体更换：每两天更换培养液，以确保培养环境适宜细胞生长。

备注：建议客户同时购买相关培养基以获得优惠。

处理细胞的最佳方法是在接收细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态。对细胞进行显微镜观察，并拍摄不同倍数的照片，前三天的照片作为售后服务的重要依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

细胞传代步骤如下：

贴壁细胞传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞状况。

3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤：

1. 半换液法：将培养瓶竖置在培养箱静置1小时，轻轻吸掉3ml培养基，然后补给3ml的完全培养基。

2. 离心换液法：将细胞悬液收集至离心管中，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬，然后按照1:2的比例分瓶。

细胞冻存及复苏：

1. 冻存：当细胞生长至80%覆盖率时，弃去培养液，用PBS洗涤一次，添加胰蛋白酶消化液，观察细胞反应。

2. 将沉淀细胞加入无血清冻存液，混匀后放入冻存管，直接放入-80℃冰箱存储。如需转入液氮罐，需先在-80℃冰箱存放24小时以上。

3. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴解冻并消毒。将细胞转移至含有培养基的离心管中，1000 RPM离心5分钟，重悬后接种至T25培养瓶。

在整个细胞培养过程中，尊龙凯时提供全方位的技术支持与服务，确保每位客户都能顺利进行细胞实验。如有任何疑问，请及时联系我们的专业团队。