尊龙凯时推出的猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）是一种高效的检测工具，旨在定性检测猪蓝耳病病毒。该试剂盒的使用说明如下：

产品概述

产品名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）
英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光PCR原理，具有对猪蓝耳病病毒的快速而准确的定性检测能力，为病毒的诊断及疗效评估提供了重要指导。

原理

该试剂盒设计了针对猪蓝耳病病毒高度保守区域的特异性引物和探针。在PCR反应体系中，若存在病毒基因组模板，将释放荧光信号，通过荧光定量PCR仪实时监测结果，实现定性分析。

试剂盒组成

本试剂盒包含：
1. PRRSV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
2. PRRSV混合酶液 125 μL × 1管
3. PRRSV阳性对照 40 μL × 1管
4. PRRSV阴性对照 40 μL × 1管
5. 使用说明书 1份
注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

储存条件与有效期

请将试剂盒避光存放于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

该试剂盒适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取，并置于离心管中。
2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样本20g，加少量灭菌PBS，研磨后稀释成乳剂，8000rpm 4℃离心10min，取上清待检。
3. 避免标本间交叉污染。
4. 样本可立即检测，若不能则需在2～8℃下冷藏过夜；长期保存需冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法

1. **试剂准备**
从冰箱中取出试剂盒，取所需试剂充分融化混匀，并瞬时离心去除管壁附着液体。计算实验所需反应数量并按照要求配置试剂量。
- RT-PCR反应液 175 μL
- 混合酶 25 μL

2. **样本准备**
使用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，按照说明书操作。
3. **加样**
将处理好的标本RNA各5μL加入PCR反应样本管，终体积25μL，盖好PCR反应盖，混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。此外，阴性对照和阳性对照管各加5μL相应对照，终体积为25μL，进行同样处理。

PCR扩增

将PCR反应管放置在荧光定量PCR仪的样品槽内，并记录放置顺序，按以下参数设置仪器进行PCR扩增。
- 反应体积：25μL
- 通道选择：FAM通道
- PCR反应条件：
- 反转录：50℃，10min
- 预变性：95℃，3min
- PCR扩增：95℃，5s；55℃，40s（此阶段结束时采集荧光信号）

参考值

1. **试剂盒有效性判定**：
- 阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
- 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2. **标本结果判定**：
- 阳性：Ct值≤35或有明显指数增长期。
- 可疑：Ct值在35~38范围内，需重复检测确认结果。
- 阴性：Ct值＞38或无Ct值。

检测结果解释

通道及检测结果解释：
FAM+：标本中检出猪蓝耳病病毒
FAM-：标本中未检出猪蓝耳病病毒

检验方法的局限性

1. 若样本中被检核酸浓度低于最低检出限，可能发生假阴性结果。
2. 样本在处理过程中操作不当可能造成RNA降解，产生假阴性结果。
3. 样本间发生交叉污染，会导致假阳性结果。

产品性能指标

本产品的最低检出限为103 Copies/mL，CV值≤3%。

注意事项

1. 实验室应严格按照国家基因扩增检验实验室管理规范进行管理。
2. 为避免RNA降解，应在0-4℃下处理样本，实验后及时检测。
3. 各区域的器材应专用，不得交叉使用，以免污染。
4. 操作时应避免气泡产生，确保PCR反应管盖紧。
5. 所有试剂在使用前需充分融化并瞬时离心。
6. 阴性及阳性对照需单独存放于标本准备区。
7. 为防止荧光干扰，应避免直接接触PCR反应管，并避免在管上进行标记。
8. 使用过的吸头应直接丢弃，工作台需定期消毒。
9. 仪器参数应严格按照说明书要求设置，并在有效期内使用。

尊龙凯时致力于提供高质量的检测产品，帮助用户准确、高效地进行猪蓝耳病病毒的检测与诊断。